2025版中国药典差异分析及应对策略之二 ：1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
发布时间：2025-10-13 浏览次数：30
2025版中国药典已于2025年10月正式实施，本次1105无菌检查法的变动主要在培养基适用性，对照培养基，检验数量，计数规则等方面，本文尝试从以下方面进行差异分析并给出应对策略。
2.差异分析及应对策略。
2.1.培养基适用性：
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培养基适用性检查 | 微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。 | 每批微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应符合培养基适用性检查的要求。 |
按表1规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置表1规定条件下培养。每一试验菌株平行制备2管或2个平板。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 | 按表1规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基，置表1规定条件下培养。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 |
应对策略：①目前中国药典和欧美药典接轨，强调每批培养基（包括灭菌批）都需要做培养基适用性，所以建议灭菌锅小，用量比较大的企业，考虑每次购买需求量的商品化成品培养基，以应对2025版中国药典的新要求，减轻工作量。
②用量小的企业，可以从以下方面提前准备：提前做菌液有效期验证，超低温冰箱保存冻存菌株，修订相关菌种管理文件。
2.2.取样量：
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除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂、贴剂和贴膏剂为100cm2。检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂、贴剂和贴膏剂还不得少于4片。 | 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂、贴剂和贴膏剂为10贴或100cm2。检验时，应从不少于2个最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4丸，按面积取样的供试品还不得少于4片。 |
贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。若供试品处方中每一剂量单位（如片剂、胶囊剂）活性物质含量小于或等于1mg，或每1g或每1ml（指制剂）活性物质含量低于1mg时，检验量应不少于10个剂量单位或10g或10ml供试品；若样品量有限或批产量极小（如：小于1000ml或1000g）的活性物质供试品，除另有规定外，其检验量最少为批产量的1%，检验量更少时需要进行风险评估；若批产量少于200的供试品，检验量可减少至2个单位；批产量少于100的供试品，检验量可减少至1个单位。 | 制剂的检验量在满足以下条件可以酌减，若批产量少于200的供试品（如临床研究样品)，检验量可减少至2个单位；若批产量少于100的供试品，检验量可减少至1个单位，贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减，检验量减少时需进行合理性评估；气雾剂的检验量应不少于10个包装单位。 |
原料药的检验量在满足以下条件可以酌减:若单剂量(如每片、每胶囊或每支)产品中活性物质含量小于或等于1mg，或多剂量产品每1g或每1ml中活性物质含量小于1mg时，原料药的检验量应不少于10个剂量单位或10g或10ml产品中所含原料的量。若样品量有限或批产量极小(如小于1000ml或1000g)的活性物质供试品。除另有规定外，其检验量最少为批产量的1%。 |
应对策略：检查产品的质量标准里关于取样检验量部分，若是检验量比新版的少，则要进行评估，是否需要重新做验证，并修改相应的文件。
2.3.计数规则：
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2.薄膜过滤法 | 除另有规定外，按计数方法适用性试验确认的方法进行供试液制备。取相当于1g、1ml或10cm2供试品的供试液，若供试品所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液，照方法适用性试验确认的方法加至适量稀释液中，立即过滤，冲洗，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上培养。 | 除另有规定外，取规定量供试品，按计数方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定。每稀释级每种培养基至少制备1张滤膜，培养条件和计数方法同平皿法。 |
培养和计数 培养条件和计数方法同平皿法，每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。 | / | |
菌数报告规则以相当于1g、1ml或10cm2供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜1报告菌数(每张滤膜过滤1g、1ml或10cm2供试品)，或＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 | 菌数报告规则以相当于1g、1ml、1贴或10cm2供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜1报告菌数(每张滤膜过滤1g、1ml、1贴或10cm2供试品)，或＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 |
应对策略：修订相关SOP，在方法学验证时，菌落计数结果不宜太低，不宜低20cfu，来确保结果的准确性。黑曲霉菌的薄膜过滤法的计数结果，宜在20-50cfu之间，不宜太高，以免造成无法计数的情况发生。
2.4对照培养基：
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对照培养基系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基适用性检查，以保证药品微生物检验用培养基的质量。对照培养基由中国食品药品检定研究院研制及分发。 | 对照培养基系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基适用性检查，以保证药品微生物检验用培养基的质量.对照培养基一般由中国食品药品检定研究院研制及分发，如需自行选择对照培养基，应进行充分的风险评估，确保其符合检查方法的要求及检验结果的一致性。 |
应对策略：修订SOP关于对照培养基的定义及来源。在9202指导原则里，对对照培养基的来源进行了修改，允许企业自行选择培养基，这点意义很重大，给企业降低了很多成本。建议企业采购一些优质的进口培养基或商品化成品培养基作为对照培养基，或者参考USP的做法，用上一批适用性合格的培养基作为对照培养基。
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