化妆品中霉菌和酵母菌的检验方法（征求意见稿）- 中检院征求意见稿：对比分析
发布时间：2026-03-17 浏览次数：34
2026年2月6日，中检院发布了关于公开征求《化妆品中微生物检验方法总则（征求意见稿）》等6项化妆品标准意见的通知，本文对菌落总数检验结合原2015年版进行了对比解读，最大变化是调整了计数规则和培养温度。
征求意见稿：
1. 修改了霉菌和酵母菌计数培养基的名称和配方，将原“孟加拉红培养基”修改为“卵磷脂-吐温80-孟加拉红培养基”；
2. 修改了霉菌和酵母菌的培养温度范围，将原“28±2℃”修改为“25±1℃”；
3. 增加了方法适用性试验的标准菌株；
4. 在计数方法中新增“薄膜过滤法”；
5. 修改了适宜的菌落计数范围，将原标准中规定的“5～50 CFU”修改为“15～150CFU”。
（编者按：灰色字体带中划线的，是原版的内容，在新版中删除了。蓝色字体的，为征求意见稿的内容。）
化妆品中霉菌和酵母菌的检验方法（征求意见稿）
1 范围
本规范规定了化妆品中霉菌和酵母菌数的检验方法。
本规范适用于化妆品中霉菌和酵母菌数的测定。
2 定义
霉菌和酵母菌数 Mold and Yeast Count
化妆品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的霉菌和酵母菌总数，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染的程度及其一般卫生状况。
本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，使用 虎红 卵磷脂-吐温80-孟加拉红琼脂培养基，置 28℃±2℃ 25±1℃培养5 d，计算所生长的霉菌和酵母菌数。
3 菌种（新增）
注：用于适用性试验和检验过程中的质量控制。
4 设备和材料
4.1 恒温培养箱：28℃±2℃25±1℃。
4.2 振荡器 旋涡混合器。
4.3 三角瓶：150 mL、250 mL、500 mL。
4.4 试管：18 mm×150 mm。
4.5 无菌平皿：直径90 mm。
4.6 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）。
4.7 量筒：200 mL。
4.8 酒精灯。
4.9 高压灭菌器。
4.10 放大镜或/和菌落计数器。
4.11 恒温水浴箱。
5 培养基、冲洗液和试剂
5.1 生理盐水：见微生物检验方法总则中附录。
5.2 （虎红（孟加拉红） 卵磷脂-吐温80-孟加拉红培养基
成分：蛋白胨 5.0 g
葡萄糖 10.0 g
磷酸二氢钾 1.0 g
硫酸镁（MgSO4·7H2O） 0.5 g
琼脂 20.0 g
卵磷脂 1.0 g
吐温80 7.0 g
孟加拉红0.033 g（1/3000虎红溶液 四氢四碘荧光素）
氯霉素 0.1 g
蒸馏水 1000 mL
制法：将上述各成分加入蒸馏水中，加热溶解，补足蒸馏水至1000 mL，分装后，121℃高压灭菌15 min，避光保存备用。（原版：制法:将上述各成分(除虎红外)加入蒸馏水中溶解后，再加入虎红溶液。分装后，483121℃高压灭菌 20min，另用少量乙醇溶解氯霉素，溶解过滤后加入培养基中，若无氯霉素，使用时每 1000mL 加链霉素 30mg。）
5.3 pH7. 0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（新增）
成分：磷酸二氢钾 3.56 g
无水磷酸氢二钠 5.77 g
氯化钠 4.30 g
蛋白胨 1.00 g
蒸馏水 1000 mL
制法：称取上述成分，微温溶解，必要时滤过使澄清，分装，121℃高压灭菌15 min，备用。
根据检样的特性，可选用生理盐水、pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他经验证的适宜溶液作为冲洗液。如需要，可在上述冲洗液灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
6 操作步骤
6.1 样品的稀释
用灭菌吸管吸取1:10的检液1 mL注入到9 mL 稀释液（灭菌生理盐水或其他适宜的稀释液）中（注意勿使吸管接触液面），充分混匀，制成1:100检液。样品至少需进行1:10和1:100稀释，如样品含菌量高，还可再稀释成1:1000、1:10000、……等，每个稀释度应更换1支吸管。（原版：见菌落总数测定中 5.1。）
6.2 平板计数方法
6.2.1 平板倾注法
用灭菌吸管吸取上述不同稀释度的检液各2 mL，分别注入2个灭菌平皿内，每皿1 mL。将融化并冷却至44~48℃的卵磷脂-吐温80-孟加拉红培养基倾注到平皿内，每皿15～20 mL，使检液与培养基充分混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，倒置于25±1℃培养箱内培养，逐日观察并记录培养至第5 d的结果。
（原版：5.2 取1:10、1:100、1:1000 的检液各 1mL 分别注入灭菌平皿内，每个稀释度各用 2 个平皿，注入融化并冷至 45℃+1℃左右的虎红培养基，充分摇匀。凝固后，翻转平板，置 28C2C培养 5d，观察并记录。另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入约 15mL 虎红培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置 28℃+2C培养箱内培养 5d，为空白对照。）
6.2.2 薄膜过滤法（新增）
抑菌性较强的样品，若性质允许，可采用薄膜过滤法进行计数。薄膜过滤法操作步骤见微生物检验方法总则中5.2.3.2。冲洗完成后，将滤膜取出，过滤面朝上贴于卵磷脂-吐温80-孟加拉红培养基平板上，翻转平板，倒置于25±1℃培养箱内培养，逐日观察并记录培养至第5 d的结果。
以稀释液代替检液，按照相应计数方法的规定进行阴性对照试验。
6.3 菌落计数
6.3.1 观察并记录稀释倍数及相应的霉菌和酵母菌数，必要时可用放大镜或菌落计数器辅助观察。计数结果以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
6.3.2 选取菌落数在15～150 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板，根据菌落形态计数霉菌和酵母菌总数。菌落蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落蔓延。
（原版：5.3 计算方法：
先点数每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落数。判定结果时，应选取菌落数在5个-50 个范围之内的平皿计数，乘以稀释倍数后，即为每g(或每 mL)检样中所含的霉菌和酵母菌数。其他范围内的菌落数报告应参照菌落总数的报告方法报告之。）
7 结果与报告
7.1 计算方法
7.1.1 若只有一个稀释度的两个平板菌落数在适宜计数范围内，计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，即为每g（mL）样品中所含的霉菌和酵母菌数。
7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，则按照“菌落总数检验方法”的相应规定进行计算。
7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于150 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于15 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.1.5 若所有稀释度平板均无菌落生长或平均菌落数小于1时，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在15～150 CFU之间，其中一部分小于15 CFU或大于150 CFU时，则以最接近15 CFU或150 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.1.7 薄膜过滤法适宜计数范围和计算方法同平板倾注法。
7.2 结果报告
7.2.1 霉菌和酵母菌数小于100 CFU时，按实有数值以整数报告。
7.2.2 霉菌和酵母菌数大于或等于100 CFU时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
7.2.3 若阴性对照平板上有菌落生长，则此次检验结果无效。
7.2.4 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
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