【2025版中国药典系列】修订《非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》

在药品质量控制体系中，非无菌产品微生物限度检查作为保障药品安全性和有效性的关键环节，备受制药行业的特别关注。2025 版《中国药典》对非无菌产品微生物限度检查方法（通则 1105）的修订，不仅体现了我国药品标准与国际先进水平的进一步接轨，更对药品生产、检验及监管等各个环节提出了新的要求和挑战。本文将深入探讨 2025 版《中国药典》非无菌产品微生物限度检查法的具体要求，与国际主要药典（美国 USP、欧州药典、英国药典、日本 JP）进行详细的对比分析，剖析实施过程中的重点难点和风险点，并阐述其对行业的影响及应对策略，旨在为药品检验专业人士提供全面且深入的解读，助力行业更好地适应这一变化。

本次修订涵盖了菌液制备、培养基适用性检查、供试品处理、计数方法及报告规则等多个关键技术环节。同时，新版药典还理顺和明确了各类非无菌产品（如呼吸道吸入给药制剂、直肠给药制剂及其他局部给药制剂）的微生物限度标准，并独立了原辅料评估内容，使微生物检查的限度要求更加科学和准确。这些变革对药品生产企业、检验机构及研发单位都提出了新的要求，需要行业及时理解和掌握新规，调整相关质量控制策略和方法，以确保药品微生物安全。

一、2025 版《中国药典》非无菌产品微生物限度检查要求深度解读

1、菌液制备：灵活性与精确性的提升

2025 版《中国药典》在菌液制备环节展现出显著的优化。相较于 2020 年版，新增了“pH7.2无菌磷酸盐缓冲液”作为制备菌悬液的选择之一。这一缓冲液的引入，丰富了实验人员根据不同试验菌株特性进行灵活选择的空间，有助于更好地维持微生物的生理活性，从而提高微生物限度检查的准确性。同时，将黑曲霉孢子悬液制备中聚山梨酯 80 的浓度单位从“ml/ml”改为“g/ml”，看似细微的变化，实则体现了对实验精确性的更高追求。这一单位的统一，避免了因不同密度液体换算导致的浓度误差，使得实验条件更加标准化，可重复性更强。例如，在实际操作中，使用“g/ml”单位能更准确地配置出所需浓度的聚山梨酯 80 溶液，确保黑曲霉孢子的洗脱效果稳定，进而保障后续微生物计数的可靠性。

2、阴性对照：概念简化与调查强化

阴性对照试验在微生物限度检查中起着至关重要的作用，它是判断整个试验过程是否受到污染以及试验条件是否符合要求的关键指标。2025 版《中国药典》对阴性对照的描述进行了简化，删掉了“偏差”二字，将“应进行偏差调查”改为“应进行调查”。这一改动并非简单的文字删减，而是对阴性对照有菌生长情况处理思路的调整。“偏差”一词在以往的理解中可能会使实验人员将关注点局限于对偏离标准操作流程的查找，而删掉“偏差”后，调查的范围更加宽泛，涵盖了可能导致阴性对照有菌生长的所有因素，包括但不限于环境因素、试剂质量、仪器设备的潜在污染等。这种变化要求实验人员具备更全面的质量控制意识和问题排查能力，确保每一次微生物限度检查结果的可靠性。

3、培养基适用性检查：严格化与规范化

培养基作为微生物生长的营养基质，其适用性直接关系到微生物限度检查结果的准确性。2025 版《中国药典》在培养基适用性检查方面进行了多方面的严格化和规范化处理。首先，明确增加“每批”培养基均需进行适用性检查，这一要求杜绝了以往可能存在的跨批次使用未经检查培养基的情况，确保每一次实验所使用的培养基质量均符合要求。其次，删掉“平板”二字，以及“每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平板使用单独的管或平板”的描述，使得实验操作更加灵活。实验人员可以根据实际情况选择使用试管或平板进行接种培养，不再受固定模式的限制，但同时也对实验人员的操作规范和质量控制能力提出了更高要求，需要通过有效的验证手段来确保不同操作方式下培养基适用性检查结果的一致性和可靠性。

4、水溶性供试品处理：无菌性强调与稀释灵活性

对于水溶性供试品的处理，2025 版《中国药典》着重强调了缓冲液的无菌性，在 pH7.2 磷酸盐缓冲液前增加了“无菌”二字。这一变化凸显了微生物限度检查中防止外源性微生物污染的重要性，因为即使是微量的外源性污染也可能对供试品中微生物的计数和检测产生干扰，导致结果出现偏差。同时，删掉“10 倍系列”稀释的表述，改为“进一步稀释”，赋予了实验人员根据供试品的具体特性和微生物污染情况选择合适稀释倍数的灵活性。例如，对于某些微生物含量较低的供试品，可能需要采用较小的稀释倍数以确保能够准确检测到微生物；而对于微生物含量较高的供试品，则可以选择较大的稀释倍数，避免菌落过于密集而无法准确计数。这种灵活性的提升有助于提高微生物限度检查的准确性和针对性。

5、油脂类供试品处理：灭菌方法明确

油脂类供试品由于其特殊的物理性质，在微生物限度检查中的处理方法有别于水溶性供试品。2025 版《中国药典》针对油脂类供试品中使用的无菌十四烷酸异丙酯的制备方法增加了详细备注，明确指出可采用薄膜过滤法过滤除菌，选用孔径为 0.22μm 的适宜滤膜，或其他适宜的灭菌方法。这一补充信息为实验人员提供了明确的操作指导，确保在溶解油脂类供试品时所使用的十四烷酸异丙酯符合无菌要求，从而避免因溶剂引入微生物而影响检测结果。在实际操作中，薄膜过滤法因其高效的除菌能力和对油脂类物质的兼容性，成为一种常用的灭菌方法，但实验人员仍需根据具体情况选择合适的滤膜材质和操作条件，以确保除菌效果和供试品的稳定性。

6、涂布法：干燥方式明确

在涂布法操作中，培养基表面的干燥程度对微生物的生长和计数有着重要影响。2025 版《中国药典》增加了“（如，在层流罩下或培养箱中干燥）”的描述，为培养基表面干燥提供了具体的操作方法指导。在层流罩下干燥，能够有效避免空气中微生物的污染，保证干燥过程的无菌环境；而在培养箱中干燥，则可以利用培养箱内稳定的温度和湿度条件，使培养基表面的水分均匀蒸发，避免因干燥不均匀导致微生物生长环境不一致。这种明确的干燥方式指导，有助于减少实验操作中的不确定性，提高涂布法微生物计数的准确性和重复性。

7、薄膜过滤法：操作优化与检验量细化

薄膜过滤法在非无菌产品微生物限度检查中是一种常用且有效的方法。2025 版《中国药典》在薄膜过滤法方面进行了多方面的优化。在检验量方面，增加了“1 贴”作为供试液取样单位，进一步完善了对贴剂类产品的检验要求，使其更贴合实际生产和检验的需求。在操作描述方面，简化了供试液制备和菌数测定的步骤，删掉了“培养和计数”部分的重复描述，并明确规定每稀释级每种培养基至少制备 1 张滤膜。这一规定确保了在不同稀释级下都能有足够的样本量进行检测，提高了检测结果的可靠性。同时，简化的操作描述避免了实验人员在操作过程中因重复信息导致的混淆，提高了操作的效率和准确性。

8、检验量：基于产品特性的精细化规定

2025 版《中国药典》对检验量的规定进行了全面而细致的调整，充分考虑了不同类型产品的特性和实际生产情况。对于膜剂、贴剂和贴膏剂，增加了“10 贴”作为检验量单位，与原有的“100cm²”共同为这类产品的检验提供了更灵活和全面的选择。对于制剂，明确了批产量与检验量酌减的关系，批产量少于 200 的供试品，检验量可减少至 2 个单位；批产量少于 100 的供试品，检验量可减少至 1 个单位，同时强调贵重药品、微量包装药品检验量减少时需进行合理性评估和审批。对于原料药，也根据活性物质含量制定了详细的检验量标准，单剂量产品中活性物质含量小于或等于 1mg，或多剂量产品每 1g 或每 1ml 中活性物质含量小于 1mg 时，原料药的检验量应不少于 10 个剂量单位或 10g 或 10ml 产品中所含原料的量。这些精细化的规定，使得检验量的确定更加科学合理，既保证了能够充分检测出产品中的微生物污染情况，又避免了不必要的资源浪费，同时也为药品生产企业在产品研发和质量控制过程中提供了明确的指导。

9、菌数报告规则：严格化与国际接轨

菌数报告规则是微生物限度检查结果呈现的关键环节。2025 版《中国药典》将需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 250cfu 的稀释级，霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于 50cfu 的稀释级，作为菌数报告的依据，相较于 2020 年版的 300cfu 和 100cfu 有了明显的降低。这一变化不仅提高了对药品微生物质量的要求，也体现了我国药典与国际标准的进一步接轨。降低菌落数的上限，能够更敏感地检测出药品中潜在的微生物污染，及时发现质量问题，保障患者用药安全。同时，这也对药品生产企业的生产环境控制、原材料质量把控以及生产工艺的稳定性提出了更高的挑战，促使企业不断优化生产流程，加强质量控制体系建设。

二、2025 版《中国药典》与各国药典的对比分析

相同点

• 菌液制备：美国 USP、欧洲药典、英国药典、日本 JP 与 2025 版《中国药典》在菌液制备方面均强调使用适宜的缓冲液或溶液来制备菌悬液，以确保微生物在实验过程中的活性和稳定性。同时，都要求菌悬液的浓度适宜，能够满足后续微生物限度检查的需求，通过精确的浓度控制来保证实验结果的准确性和可重复性。

• 阴性对照：各药典都明确要求进行阴性对照试验，将其作为判断试验条件是否符合要求的重要手段。阴性对照试验应确保无菌生长，一旦出现有菌生长的情况，均需进行调查，以排查可能导致污染的原因，保证微生物限度检查结果不受干扰。

• 培养基适用性检查：国际主要药典均高度重视培养基适用性检查，要求对微生物计数用的培养基进行严格的质量把控。通过接种标准菌株进行培养，观察菌落生长情况，以验证培养基是否能够支持微生物的正常生长，确保培养基的质量和适用性符合要求。

• 检验量：在检验量的规定上，各药典都充分考虑到要确保检验量能够充分反映供试品的微生物污染水平。对于贵重药品、微量包装药品等特殊情况，都允许在进行合理性评估的基础上适当减少检验量，以平衡检验成本和检验准确性的关系。

不同点

• 菌液制备：美国 USP 强调使用特定的培养基和缓冲液，如胰酪大豆胨液体培养基（TSB）和胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA），对实验条件的标准化要求较高；欧洲药典对菌液制备的缓冲液和溶液的选择更为灵活，给予实验人员更大的操作空间；英国药典对菌液制备的浓度和方法有详细规定，注重无菌操作的细节把控；日本 JP 对菌液制备的缓冲液和溶液的选择与欧盟药典类似，但对浓度单位的规定更为明确，避免了因单位换算可能产生的误差。

• 培养基适用性检查：美国 USP 要求对每批培养基进行适用性检查，并详细规定了检查方法和标准，具有很强的可操作性和规范性；欧洲药典对培养基适用性检查的要求较为灵活，允许根据实际情况选择合适的检查方法，更注重实验人员的经验和判断；英国药典对培养基适用性检查的要求与美国 USP 类似，但对检查频率有更明确的规定，确保培养基质量的持续稳定性；日本 JP 对培养基适用性检查的要求较为严格，强调每批培养基均需进行适用性检查，并且对检查结果的判定标准也有明确规定。

• 检验量：美国 USP 对检验量有详细规定，特别针对不同剂型和包装的药品制定了具体的检验量要求，具有很强的针对性；欧洲药典对检验量的规定较为灵活，允许根据实际情况进行调整，更注重检验的实际效果；英国药典对检验量的规定与美国 USP 类似，但对特殊情况的处理更为详细，如对于含有特殊成分或生产工艺复杂的药品，有专门的检验量评估方法；日本 JP 对检验量的规定较为严格，特别强调对贵重药品和微量包装药品的检验量要求，以确保这些药品的质量安全。

• 菌数报告规则：美国 USP 对菌数报告规则有详细规定，特别强调对不同菌种的菌落数上限要求，并且根据不同的药品类型和用途制定了差异化的标准；欧洲药典对菌数报告规则的要求较为灵活，允许根据实际情况选择合适的菌落数上限，注重实验结果的实际意义；英国药典对菌数报告规则的规定与美国 USP 类似，但对特殊情况的处理更为细致，如对于一些难以计数的微生物或特殊的实验条件，有相应的处理方法；日本 JP 对菌数报告规则的要求较为严格，特别强调对不同菌种的菌落数上限要求，并且对报告结果的准确性和可靠性有严格的审核机制。

三、微生物限度检查的重点难点和风险点分析

重点难点

• 菌液制备：确保菌悬液的浓度适宜和无菌操作是菌液制备的重点和难点。不同菌种对培养条件和缓冲液的要求各异，实验人员需要深入了解各菌种的特性，准确选择合适的培养条件和缓冲液，以维持微生物的活性。同时，在菌液制备过程中，严格的无菌操作是防止外源性污染的关键，任何细微的操作失误都可能导致菌悬液受到污染，从而影响微生物限度检查的结果。

• 培养基适用性检查：培养基适用性检查是微生物限度检查中的关键环节，也是一个重点难点。每批培养基均需进行适用性检查，这对实验室的工作量和质量控制能力提出了较高要求。检查方法和标准需要严格按照药典要求进行操作，实验人员需要具备扎实的专业知识和丰富的实践经验，能够准确判断培养基是否符合要求。此外，对于一些特殊培养基或新型培养基，可能需要进行额外的验证和研究，以确保其适用性。

• 检验量：确定合理的检验量是微生物限度检查的重要环节，也是一个难点。对于不同剂型和包装的药品，检验量需要根据具体情况进行调整，既要保证能够充分检测出微生物污染情况，又要避免过度检验造成资源浪费。特别是对于贵重药品和微量包装药品，检验量的减少需要进行全面的合理性评估和审批，需要综合考虑药品的生产工艺、质量稳定性、微生物污染风险等多方面因素。

• 菌数报告规则：菌数报告规则的调整是 2025 版《中国药典》的重要变化之一，确保菌落数的报告准确性和可重复性是菌数报告规则的重点和难点。不同菌种的菌落数上限需要严格按照药典要求进行选择，实验人员需要熟练掌握菌数报告的方法和标准，避免因主观判断失误或操作不当导致报告结果出现偏差。同时，在实际操作中，可能会遇到一些特殊情况，如菌落形态异常、生长环境复杂等，需要实验人员具备较强的分析和判断能力，确保报告结果能够真实反映微生物污染情况。

风险点

• 菌液制备：菌液制备过程中存在着微生物污染的风险。无菌操作环境的不完善、实验器具的灭菌不彻底、操作人员的不规范操作等都可能导致菌悬液受到外源性微生物的污染，从而使微生物限度检查结果出现偏差，无法真实反映供试品的微生物质量状况。

• 培养基适用性检查：培养基适用性检查过程中可能出现操作失误或培养基质量问题的风险。例如，接种量不准确、培养条件控制不当、培养基保存不善等都可能导致检查结果不准确。此外，对于商品化的预制培养基，可能存在生产厂家质量不稳定的情况，需要实验室加强对培养基供应商的评估和管理。

• 检验量：检验量的确定不当可能导致微生物限度检查结果不准确的风险。检验量不足可能无法检测出供试品中的微生物污染，从而使不合格产品流入市场；而检验量过多则会造成资源浪费和时间成本增加。特别是对于一些新型药品或复杂制剂，由于缺乏足够的研究数据，检验量的确定可能存在一定的困难和风险。

• 菌数报告规则：菌数报告规则的调整可能导致报告结果不准确的风险。实验人员对新规则的理解和掌握程度不足，可能会在菌落计数和报告过程中出现错误。此外，不同实验室之间的操作差异和仪器设备的差异也可能导致菌数报告结果的不一致性，需要加强实验室间的比对和质量控制。

四、2025 版《中国药典》修订对行业的影响及应对策略

1、对行业的影响

• 提高检查标准，加强质量控制：2025 版《中国药典》对非无菌产品微生物限度检查方法的修订，显著提高了检查标准，使得药品生产企业和检验机构必须加强自身的质量控制体系建设。企业需要对生产环境、原材料采购、生产工艺等各个环节进行更严格的把控，确保药品在整个生产过程中不受微生物污染。这将有助于提高我国药品的整体质量水平，保障患者用药安全。

• 促进国际化接轨，提升国际竞争力：通过与国际主要药典的对比分析可以看出，2025 版《中国药典》在多个方面与国际标准更加接近，如菌数报告规则的调整、培养基适用性检查的严格化等。这种国际化接轨的趋势，将有助于我国药品生产企业的产品进入国际市场，减少因标准差异导致的贸易壁垒。同时，也促使企业按照国际先进标准进行生产和质量控制，提升我国药品在国际市场上的竞争力。

• 推动技术升级，优化产业结构：新版药典对微生物限度检查技术和方法提出了更高要求，如对菌液制备的精确性、薄膜过滤法的规范化操作等，这将推动药品生产企业和检验机构进行技术升级。企业需要投入更多的资金用于购置先进的检验设备、研发新的检测技术，同时培养具备更高专业素养的技术人员。这种技术升级将进一步优化我国医药产业结构，淘汰那些技术落后、质量控制能力不足的企业，促进产业向高质量、高技术方向发展。

• 增加企业成本，引发行业洗牌：从短期来看，新版药典的实施将在一定程度上增加企业的成本。企业需要投入资金用于设备更新、人员培训、方法验证等方面，同时由于检查标准的提高，可能会导致部分产品因不符合要求而面临整改或停产。这种成本压力和合规压力可能会引发行业洗牌，一些规模较小、资金实力薄弱、质量控制体系不完善的企业可能会被市场淘汰，而那些规模较大、技术实力雄厚、注重质量的企业将在市场竞争中占据更有利的地位。

2、应对策略

• 加强人员培训，提升专业素养：药品生产企业和检验机构应高度重视人员培训工作，制定系统的培训计划，确保相关人员能够全面掌握 2025 版《中国药典》非无菌产品微生物限度检查的新要求、新方法。培训内容应包括药典修订的核心内容、实验操作技能、质量控制理念、国际药典标准等方面。可以通过邀请行业专家进行授课、开展内部培训、组织人员参加行业研讨会和培训班等多种方式，提升人员的专业素养和操作水平。同时，建立完善的人员考核机制，定期对人员的培训效果进行考核，确保培训工作取得实效。

• 完善质量控制体系，强化过程管理：企业应根据新版药典的要求，对现有的质量控制体系进行全面梳理和完善。建立从原材料采购、生产过程控制到成品检验的全过程质量控制体系，加强对每个环节的监控和管理。在原材料采购方面，严格审核供应商资质，对原材料进行严格的微生物限度检查，确保原材料质量符合要求；在生产过程中，加强对生产环境的洁净度控制，规范生产操作流程，防止微生物污染；在成品检验环节，严格按照新版药典的方法和标准进行检验，确保成品质量合格。同时，建立质量追溯体系，一旦发现质量问题，能够及时追溯到问题的根源，并采取有效的纠正和预防措施。

• 加大技术研发投入，推动技术升级：企业应加大对技术研发的投入，积极开展微生物限度检查技术和方法的研究与创新。针对新版药典提出的新要求，如菌液制备的精确性、薄膜过滤法的规范化操作等，研发相应的技术和设备，提高实验操作的准确性和效率。同时，关注国际上微生物检测技术的发展趋势，积极引进和消化吸收国际先进技术，推动企业的技术升级。此外，加强与科研机构、高等院校的合作，开展产学研合作项目，共同攻克技术难题，提升企业的技术创新能力。

• 加强供应链管理，确保原材料质量：原材料的质量直接影响药品的质量，因此企业应加强对供应链的管理。建立严格的供应商评估和选择机制，对供应商的生产能力、质量控制体系、信誉等方面进行全面评估，选择优质的供应商建立长期稳定的合作关系。同时，与供应商签订详细的质量协议，明确原材料的质量标准和检验要求，要求供应商提供相关的质量证明文件。定期对供应商进行现场审计，监督供应商的生产过程和质量控制情况，确保原材料质量的稳定性和可靠性。此外，建立原材料库存管理制度，合理控制库存数量，避免因库存时间过长导致原材料受到微生物污染。

• 积极参与行业交流与合作，共享资源与经验：药品生产企业和检验机构应积极参与行业交流与合作，加入相关的行业协会和组织，参加行业举办的研讨会、培训班、展览会等活动。通过这些活动，企业可以及时了解行业的最新动态和发展趋势，学习其他企业的先进经验和技术，加强与同行之间的沟通与协作。同时，企业之间可以共享检验设备、技术资源、人才资源等，降低企业的运营成本，提高行业的整体竞争力。此外，积极与国际同行进行交流与合作，了解国际药典标准和国际先进的质量控制理念，推动我国药品行业与国际接轨。

结  语

2025 版《中国药典》对非无菌产品微生物限度检查法的修订，它不仅体现了我国对药品质量安全的高度重视，也标志着我国药品标准与国际先进标准的进一步融合。此次修订在菌液制备、阴性对照、培养基适用性检查、供试品处理、检验量、菌数报告规则等多个关键环节进行了优化和完善，提高了检查方法的科学性、准确性和可操作性，同时也对药品生产企业、检验机构及监管部门提出了更高的要求。

从国际对比来看，我国药典与美国 USP、欧洲药典、英国药典、日本 JP 在核心原则和基本要求上保持一致，但在具体操作细节、标准制定侧重点等方面存在一定差异。这种差异既反映了各国药品监管体系和医药产业发展的特点，也为我国药品行业提供了学习和借鉴国际先进经验的机会。在全球化背景下，我国药品行业应积极推动与国际药典的协调统一，减少贸易壁垒，提升我国药品在国际市场的认可度和竞争力。

在实施新版药典的过程中，药品行业面临着诸多重点难点和风险点，如菌液制备的精确性控制、培养基适用性检查的严格执行、检验量的科学确定、菌数报告规则的准确应用等。这些问题需要行业各方共同努力，通过加强人员培训、完善质量控制体系、加大技术研发投入、加强供应链管理等措施加以解决。

此次修订对我国医药行业的影响是深远的，它将推动行业整体质量水平的提升，促进产业结构的优化升级，加速行业的国际化进程。虽然在短期内可能会给企业带来一定的成本压力和合规压力，但从长远来看，有利于行业的健康可持续发展。药品生产企业和检验机构应积极应对，主动适应新版药典的要求，不断提升自身的质量控制能力和技术水平，为保障公众用药安全、推动我国医药产业高质量发展贡献力量。同时，监管部门应加强对新版药典实施情况的监督检查，确保药典的各项要求落到实处，维护药品市场的秩序和稳定。相信在行业各方的共同努力下，我国药品行业将在新版药典的引领下，迈向更高的发展台阶。

附：《中国药典》1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法：2020年版和2025年版详细的内容变化如下：

1、菌液制备

2020年版：按表1规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入适量含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液或含0.05%（mg/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

2025年版：按表1规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液、pH7.2无菌磷酸盐缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；其中制备黑曲霉孢子悬液时缓冲液中可加入0.05%（g/ml）聚山梨酯80。

变化：增加“pH7.2 无菌磷酸盐缓冲液”； 聚山梨酯80的浓度单位改为g/ml。

2、阴性对照

2020年版：为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。

2025年版：阴性对照 为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行调查。

变化：删掉“偏差”俩字。

3、培养基适用性检查

2020年版：微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。按表1规定接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置表1规定条件下培养。每一试验菌株平行制备2管或2个平板使用单独的管或平板。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

2025年版：培养基适用性检查 每批微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应符合培养基适用性检查的要求。按表1规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基，置表1规定条件下培养。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

变化：增加“每批”俩字； 删掉“平板”俩字； 删掉“每一试验菌株平制备2管或2个平板使用单独的管或平板”。

3、水溶性供试品

2020年版：取供试品，用pH7.0无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:10的供试液。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

2025年版：取供试品，用pH7.0无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液，或pH7.2无菌磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:10的供试液。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步稀释。

变化：增加“无菌”俩字； 删掉“10倍系列”。

4、油脂类供试品

2020年版：取供试品，加入无菌十四烷酸异丙酯溶解。

2025年版：取供试品，加入无菌十四烷酸异丙酯使溶解①。

变化：增加备注“注：①无菌十四烷酸异丙酯的制备可采用薄膜过滤去过滤除菌，选用孔径为0.22μm 的适宜滤膜，或其他适宜的灭菌方法。”

5、涂布法

2020年版：取适量（通常为15～20ml）温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注入直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用适宜的方法使培养基表面干燥。

2025年版：涂布法 取适量（通常为15～20ml）温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注入直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用适宜的方法（如，在层流罩下或培养箱中干燥）使培养基表面干燥。

变化：增加“（如，在层流罩下或培养箱中干燥）”。

6、薄膜过滤法1

2020年版：供试液适量（一般取相当于1g、1ml或10cm2的供试品，若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量）。

2025年版：供试液适量（一般取相当于1g、1ml、1贴或10cm2的供试品，若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量）。

变化：增加“一贴”。

7、检验量

2020年版：膜剂、贴剂和贴膏剂为100cm²。 贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。若供试品处方中每一剂量单位（如片剂、胶囊剂）活性物质含量小于或等于1mg，或每1g或每1ml（指制剂）活性物质含量低于1mg时，检验量应不少于10个剂量单位或10g或10ml供试品；若样品量有限或批量极小（如：小于1000ml或1000g）的活性物质供试品，除另有规定外，其检验量最少为批量的1%，检验量更少时需要进行风险评估；若批量少于200的供试品，检验量可减少至2个单位；批量少于100的供试品，检验量可减少至1个单位。

2025年版：膜剂、贴剂和贴膏剂为10贴或100cm2。 制剂的检验量在满足以下条件可以酌减：若批产量少于200的供试品（如临床研究样品），检验量可减少至2个单位；批产量少于100的供试品，检验量可减少至1个单位；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减，检验量减少时需合理性评估，并进行审批；气雾剂的检验量应不少于10个包装单位。  原料药的检验量在满足以下条件可以酌减：若单剂量（如每片、每胶囊或每支）产品中活性物质含量小于或等于1mg，或多剂量产品每1g或每1ml中活性物质含量小于1mg时，原料药的检验量应不少于10个剂量单位或10g或10ml产品中所含原料的量。若样品量有限或批产量极小（如：小于 1000ml 或 l000g）的活性物质供试品，除另有规定外，其检验量最少为批产量的1%。 

变化：增加“10贴”；关于贵重药品、微量包装药品描述更改；增加制剂、原料药的检验量描述。

8、菌数报告规则

2020年版：菌数报告规则 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告的依据。

2025年版：菌数报告规则 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于250cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于50cfu的稀释级，作为菌数报告的依据。

变化：菌数报告规则中菌落数变更。

9、薄膜过滤法2

2020年版：除另有规定外，按计数方法适用性试验确认的方法进行供试液制备。取相当于1g、1ml或10cm2供试品的供试液，若供试品所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液，照方法适用性试验确认的方法，取供试液加至适量稀释液中，立即过滤，冲洗，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上培养。
培养和计数 ：培养条件和计数方法同平皿法，每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。

2025年版：除另有规定外，按计数方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定。每稀释级每种培养基至少制备1张滤膜。培养条件和计数方法同平皿法。

变化：薄膜过滤法中描述变更，并删掉“培养和计数”。

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