教你一文掌握标准菌株管理与保藏核心要点
发布时间：2025-10-29 浏览次数：306
在药品与医疗器械的微生物质量控制中，实验用标准菌株的管理是保证检验结果准确性、重现性和可比性的基石。一套严谨、规范且可溯源的菌种管理程序，对于实验室数据可靠性和法规符合性至关重要。
一、 管理原则与菌株溯源
微生物实验室菌种管理的核心目标在于标准化操作，以最大限度地减少菌种的变异、污染和特性衰退。统一制备的菌株是实验结果一致性的重要保障。
当前，全球药典体系正处于协调进程中。鉴于中国药典与国际人用药品注册技术协调会（ICH）要求的完全互认尚在推进，在涉及中美双报的项目中，策略性选择菌株来源可有效规避潜在风险。一个务实的建议是：对于黑曲霉，可同时备存美国菌种保藏中心（ATCC）和中国医学微生物菌种保藏中心（CMCC）的菌株（注：现行中国药典中的“黑曲霉”与部分国际药典中使用的“巴西曲霉”在基因水平上存在差异，此点需予以关注）；对于其他常用检定菌，优先选用ATCC菌株，有助于简化申报工作。
实验室应明确定义并管理三类菌株：
◆ 标准菌株：溯源至CMCC或ATCC等官方或公认保藏机构的原始菌株。
◆ 标准储备菌株：由标准菌株制备而成，采用适宜方法长期保存，作为传代和制备工作菌株的源头。
◆ 工作菌株：由标准储备菌株传代获得，用于日常检验工作。
必须严格记录菌株的“代”数。从保藏中心获得的冻干菌种定义为第0代，复苏后为第1代。实验室应明确规定工作菌株的传代限度（通常不超过5代），以确保其遗传和表型特性的稳定。
二、 菌种管理的核心操作程序
1）专人负责与安全操作：
菌种需指定专人管理，建立从申购、接收、储存、传代、使用到销毁的全生命周期记录。所有涉及活菌的操作必须在生物安全柜中进行，确保人员与环境安全。
2）规范接收与储存：
采购的菌种应来自认可的保藏机构。接收时需核对信息与包装完整性，登记后根据菌种特性（如斜面2-8℃、冻存管-20℃或-80℃）妥善储存，并实施定期核查制度。
3）标准化传代与保藏：
◆ 传代操作：在生物安全柜内进行，严格控制传代次数。
◆ 唯一性标识：建立清晰的菌种编号规则，应包含来源、菌种缩写、用途（工作/储备）、代次、制备日期及分装支数等信息，确保全程可追溯。
▶ 保藏方法：
◆ 斜面低温保藏法：适用于短期（如一个月内）频繁使用的工作菌株。培养后包好，于2-8℃（铜绿假单胞菌可室温）保存。
◆ 甘油冷冻管保藏法：适用于中长期保存。将菌悬液与无菌甘油混合（终浓度通常为20%），分装后于-20℃（有效期约1年）或-80℃（有效期可达5年）保存。此法为标准储备菌株和环境分离菌的优选方法。
4）环境与超标菌株的管理：
对于从洁净区环境监测、无菌检验阳性、微生物限度超标等情况下分离到的菌株，应视为重要标本进行保藏。建议采用甘油冷冻管法于-80℃保存，并建立独立的溯源编号系统（如以“EM”前缀区分），以便于后续调查与趋势分析。
5）使用与领取控制：
工作菌株须由检验员申请，经主管批准后向保管人领取。非检验用途使用需更高级别批准。商业派生菌株应明确其使用代次范围。
三、 废弃物的安全处理
所有废弃的菌种、过期菌液及使用完毕的菌悬液，必须经过可靠的灭菌处理（如121℃ 30分钟或126℃ 60分钟湿热灭菌）后方可弃置。应在传代或使用后规定的工作日内完成处理，并详细记录。
四、 记录与持续监控
完备的记录系统是质量管理的体现。所有菌种相关活动，包括传代、制备、使用、灭菌等，均需及时、准确地记录，并由操作人及复核人签字。记录应按规定期限归档保存。
管理人员需定期检查菌种储存设备的运行状况（温度、湿度）及菌种容器的完整性（如塞子是否松动、污染等）。每次传代后，需仔细核对新培养物的菌落形态等特征，确保无误后方可投入使用或保存。
温馨提示：严谨的微生物菌种管理，远不止于简单的“保管”，它是一个融合了微生物学、质量管理与法规要求的科学实践体系。通过建立并严格执行标准化的操作程序，确保菌种的溯源性、纯正性及活性，实验室方能为其出具的每一份微生物检验数据提供坚实可靠的基础，从而为药品安全与公众健康保驾护航。
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