细菌革兰氏染色液是否可以放冰箱保存？
发布时间：2025-11-24 浏览次数：22
环凯革兰氏染色液：编号029010 规格10ml*4瓶（含结晶紫、碘液、脱色酒精、沙黄复染色各1瓶）
储存条件与保质期：常温避光保存，有效期3年
对以上革兰氏染色液的储存条件近期有好学的客户提出疑问：微生物检测试剂储存条件有些是要求存放于2-8℃冰箱内，有些是要求存放于2-25℃阴凉环境中，为什么革兰氏染色液不放冰箱或阴凉保存而是常温呢？如果放的话，对革兰氏染色液是否会更好呢？那我们就对此问题进行一个较为详细的分析。
一、储存条件分析
1、结晶紫溶液：结晶紫溶液本身化学性质稳定，但其成分（染料、酒精、水）是微生物生长的良好培养基，尤其在炎热潮湿环境下容易滋生霉菌。 放入4℃冰箱冷藏 可以极大地抑制微生物生长，从而显著延长其有效期。 需要注意的是，由于草酸铵和结晶紫等染料在水/酒精混合溶剂中的溶解度通常随温度升高而增加，低温可能导致染料或媒染剂成分（如草酸铵）部分结晶析出，故从冰箱取出后，必须让其恢复到室温，在室温时分子动能增加，溶解度也随之回升，之前析出的晶体获得了重新溶解到溶剂中的能力。然后充分摇匀再使用，否则容易导致染色液浓度不均，造成染色过深或过浅。
2、 碘液：碘液中的碘易挥发，酒精也易挥发。在室温下，碘液会因挥发和氧化而逐渐失效，颜色变浅，媒染效果下降。 放入 4℃冰箱冷藏可以有效减缓这些过程，保持其化学稳定性，延长有效期。 关键注意事项：密封是重中之重！ 必须使用密封性良好的瓶子，否则碘会升华污染冰箱和其他物品，同时酒精挥发会改变碘液浓度。棕色瓶可以更好地避光保存。
3、 脱色酒精：酒精浓度是关键，因为脱色作用依赖于精确的酒精浓度（通常是95%）。冰箱内湿度高，频繁的取用和温度变化会导致瓶口产生冷凝水，这些水滴入酒精中会稀释其浓度，导致脱色能力下降，造成假阳性或假阴性结果。另外，脱色是一个物理化学过程，低温会降低分子的运动速度，可能影响脱色的速度和效果，使其与标准操作流程不符。故脱色酒精最适合在室温、密封、避光的条件下保存。只要盖子拧紧，其挥发性在有效期内是可以接受的。建议购买或配制小包装，尽快用完。
4、番红染色液：番红复染液的化学性质非常稳定，在室温避光条件下也可以保存很长时间。放入冰箱冷藏可以进一步延长其有效期，防止可能的污染。需要注意的是， 和结晶紫一样，如果冷藏，使用前应恢复到室温并混匀。
表1 革兰氏染色液推荐保存方式表
| 染色液 | 推荐保存方式 | 冰箱保存的好处 | 注意事项 |
| 结晶紫染色液 | 推荐冷藏 (2-8℃) | 显著延长有效期， 防止霉菌滋生。 | 使用前需恢复至室温并混匀， 以防结晶析出影响染色。 |
| 碘液 | 强烈推荐冷藏 (2-8℃) | 有效减缓挥发和氧化， 保持其媒染效力。 | 必须严格密封！ 防止碘升华和酒精挥发。 |
| 脱色酒精 | 常温、密封、避光 | 无 | 不推荐冷藏。低温会降低脱色能力， 冷凝水会稀释浓度。 |
| 番红染色液 | 室温或冷藏均可 | 冷藏可延长保存时间。 | 室温下相对稳定，冷藏亦可。 使用前恢复至室温。 |
二、综合建议与最佳实践
1、 分区存放：将需要冷藏的结晶紫、碘液和番红放在冰箱的一个固定区域（最好是有门的隔层），并与食品、生物样品等严格分开。
2、 严格密封：所有放入冰箱的试剂瓶盖都必须确保拧紧。可以使用封口膜进一步密封。
3、标记清晰：在瓶身上清晰地标注试剂名称、配制日期、有效期以及 “使用前恢复至室温并摇匀” 的提示。
4、 质量控制：无论采用何种保存方式，定期用已知的革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）和革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）做质控，是确保染色液有效性的最可靠方法。如果质控结果异常，应立即更换染色液。
三、冷藏后试剂如何正确操作以确保完全溶解？
仅仅恢复到室温可能不够，因为晶体可能沉在底部。请遵循以下步骤：
1、恢复到室温：将冷藏的染色液从冰箱取出，在实验台静置至少30-60分钟，使其与室温（例如25℃）达到平衡。
2、充分混匀：这是至关重要的一步。在拧紧瓶盖后，采取以下一种或多种方式：
- 剧烈涡旋：如果瓶子方便手持，可以像涡旋振荡器一样手动剧烈摇晃。
- 反复倒置：将瓶子上下颠倒多次。
- 使用振荡器：如果条件允许，放在低速振荡器上混匀几分钟。
3、质控：质控是最终标准：如果您对染色液的效果存疑，最可靠的方法就是进行质控实验。用已知的革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）和阴性菌（如大肠杆菌）涂片染色。如果染色结果清晰正确（阳性的蓝紫色，阴性的红色），如下图所示，就证明染色液功能正常，之前的结晶问题已成功解决。如果染色失败（如所有菌都是红色或所有菌都是紫色），则应更换新的染色液。
四、结论与建议
因为革兰氏染色液产品正常情况下是一整套（包含结晶紫、碘液、脱色酒精、沙黄复染色各1瓶）销售的，实际情况中有些实验室可能不具备冷库或大冰箱，实验室的小冰箱也容纳不了放置很多需冷藏的试剂，故对这个可以放置在室温的革兰氏染色液建议放在常温保存，一定要在低温冷藏的试剂才建议放在冰箱保存。当然，如果实验室有条件，可依据上述表1的推荐方式进行保存。环凯该款产品经验证过在常温保存条件上，保质期可达3年，用户可以放心使用。
