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FZ001BF2 铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48test

英文名称:Rapid Detection Kit for Pseudomonas aeruginosa (Fluorescent Probe Assays)

货 号 :FZ001BF2

规 格 :48测试/盒

用途:包装饮用水等水体中铜绿假单胞菌的定性检测(微生物快检)

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产品名称:铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
英文名称:Rapid Detection Kit for Pseudomonas aeruginosa (Fluorescent Probe Assays)

产品编号与包装规格:

编号 规格
FZ001BF248 测试/盒

产品简介:本试剂盒仅适用于水体中铜绿假单胞菌的定性检测,其他检验需按照国标《GB8538-2016食品安全国家标准 饮用天然水检测方法》开展。

检测原理:基于Real Time PCR技术,利用针对于铜绿假单胞菌特异性基因的引物、荧光探针以及其他反应所需试剂,加入待检样品即可进行扩增反应。在发生扩增过程中,荧光探针与目的基因片段结合,可被Taq酶分解并产生荧光信号,此时荧光定量PCR仪可识别该荧光信号,同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线,进而判定铜绿假单胞菌是否检出。

铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)产品组分:

铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)产品组分

储存条件与保质期:-20℃避光储存,有效期为12个月,避免反复冻融。

灵敏度:最低检验限达到100 CFU/Test

所需其他材料和适用仪器:荧光定量PCR仪(具有能够检测FAM标记的荧光通道)、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。

铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)使用指南:

1,样品前处理

   1) 样品增菌液模板 DNA 的制备:
         a) 取250 mL待检水样进行抽滤后,将滤膜置于100 mL铜绿假单胞菌增菌肉汤中,36 ℃±1 ℃前增菌18~24 h;
         b) 取以上增菌液1 mL到1.5 mL规格的无菌离心管中,6000 r/min离心5 min,完全去除上清;
         c) 加入30 μL裂解液充分悬浮管底沉淀,轻弹管壁消除气泡,99℃加热10 min;
         d) 12000 r/min离心15 min,上清即为待测样品DNA,静置冰上,长时间不用应再次离心。

   2) 可疑菌落模板 DNA 的制备:挑取可疑菌落,充分悬浮于预先加有30 μL裂解液的无菌离心管中,后按照上述步骤c)、d)操作。

2, 加样、反应

   1) 按照需求取n个PCR反应管(n=1管阴性对照+待检测样品数+1管阳性对照),从试剂盒中取出预混液,充分融化,涡旋后短暂离心,以上每管加入20 μL预混液,待用。
   2) 向上述n个反应管中分别加入阴性对照、待测样品DNA、阳性对照各5 μL,总反应体积为25 μL。盖紧管盖,短暂离心,立即进行PCR扩增反应。
   3) PCR反应体系为25 μL,取FAM检测通道,在反应阶段2中60℃时收集荧光信号,具体程序如下:

反应阶段 温度 时间 信号收集 循环数
195°C30 sec 1
295°C5 sec } 40
60°C40 sec
   注:在反应阶段2中60℃时收集荧光信号,对于多通道荧光PCR仪,取荧光素“FAM”为信号采集通道,淬灭基团选择“None”,染料校正选择“None”。

3, 结果:一般情况下,可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整,可根据所使用仪器的自身情况(如噪声等)以及选取的不同荧光通道进行调整。

   1) 质量控制:阴性对照未出现明显的S型扩增曲线或Ct值>35,阳性对照出现S型扩增曲线且其Ct值<30。若阴阳性对照不同时满足上述条件,则本次检测结果无效,应重新检测或与产品技术支持联系。

   2) 结果判读:(根据反应所得Ct值判读,具体见下表:)

Ct值 结果判读
≤35铜绿假单胞菌阳性。
35~37建议重新检测,若结果Ct≥37,则铜绿假单胞菌阴性,反之则为铜绿假单胞菌阳性。
≥37铜绿假单胞菌阴性。

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