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FZ001BF2 铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48test

英文名称:Rapid Detection Kit for Pseudomonas aeruginosa (Fluorescent Probe Assays)

货 号 :FZ001BF2

规 格 :48测试/盒

用途:包装饮用水等水体中铜绿假单胞菌的定性检测(微生物快检)

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产品名称:铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
英文名称:Rapid Detection Kit for Pseudomonas aeruginosa (Fluorescent Probe Assays)

产品编号与包装规格:

编号 规格
FZ001BF248 测试/盒

产品简介:本试剂盒仅适用于水体中铜绿假单胞菌的定性检测,其他检验需按照国标《GB8538-2016 食品安全国家标准 饮用天然水检测方法》开展。

检测原理:基于 Real Time PCR 技术,利用针对于铜绿假单胞菌特异性基因的引物、荧光探针以及其他反应所需试剂,加入待检样品即可进行扩增反应。在发生扩增过程中,荧光探针与目的基因片段结合,可被 Taq 酶分解并产生荧光信号,此时荧光定量PCR 仪可识别该荧光信号,同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线,进而判定铜绿假单胞菌是否检出。

铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)产品组分:

组分名称 规格×数量
裂解液1mL × 2管
阳性对照200μL × 1管
阴性对照200μL × 1管
预混液1mL × 1管
说明书1份

储存条件与保质期:-20℃避光储存,有效期为 12 个月,避免反复冻融。

灵敏度:最低检验限达到 100 CFU/Test

所需其他材料和适用仪器:荧光定量 PCR 仪(具有能够检测 FAM 标记的荧光通道)、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。

铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)使用指南:

1,样品前处理

   1) 样品增菌液模板 DNA 的制备:
         a) 取 250 mL 待检水样进行抽滤后,将滤膜置于 100 mL 铜绿假单胞菌增菌肉汤中,36 ℃±1 ℃前增菌 18~24 h。
         b) 取以上增菌液 1 mL 到 1.5 mL 规格的无菌离心管中,6000 r/min 离心 5 min,完全去除上清;
         c) 加入 30 μL 裂解液充分悬浮管底沉淀,轻弹管壁消除气泡,99℃加热 10 min。
         d) 12000 r/min 离心 15 min,上清即为待测样品 DNA,静置冰上,长时间不用应再次离心。

   2) 可疑菌落模板 DNA 的制备:挑取可疑菌落,充分悬浮于预先加有 30 μL 裂解液的无菌离心管中,后按照上述步骤 c)、d)操作。

2, 加样、反应

   1) 按照需求取 n 个 PCR 反应管(n=1 管阴性对照+待检测样品数+1 管阳性对照),从试剂盒中取出预混液,充分融化,涡旋后短暂离心,以上每管加入20 μL预混液,待用。
   2) 向上述 n 个反应管中分别加入阴性对照、待测样品 DNA、阳性对照各 5 μL,总反应体积为 25 μL。盖紧管盖,短暂离心,立即进行 PCR 扩增反应。
   3) PCR 反应体系为 25 μL,取 FAM 检测通道,在反应阶段 2 中 60℃时收集荧光信号,具体程序如下:

PCR反应
   注:在反应阶段 2 中 60℃时收集荧光信号,对于多通道荧光 PCR 仪,取荧光素"FAM"为信号采集通道,淬灭基团选择"None",染料校正选择"None"。

3, 结果:一般情况下,可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整,可根据所使用仪器的自身情况(如噪声等)以及选取的不同荧光通道进行调整。

   1) 质量控制:阴性对照未出现明显的 S 型扩增曲线或Ct 值>35,阳性对照出现 S 型扩增曲线且其 Ct 值<30。若阴阳性对照不同时满足上述条件,则本次检测结果无效,应重新检测或与产品技术支持联系。

   2) 结果判读:(根据反应所得 Ct 值判读,具体见下表:)

铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)结果判读

注意事项:

1. 实验环境条件和过程控制应参照 GB/T 27403《实验室质量控制规范食品分子生物学检测》规定执行。

2. 使用本试剂盒前请仔细阅读本说明书全文,检测过程中建议穿洁净工作服,戴一次性手套,使用的移液枪头需提前灭菌。

3. 试剂盒中试剂使用前需充分融化、混匀,短暂离心后使用,期间需尽量避免产生气泡,加样完毕后检查反应管是否盖紧,避免泄露造成污染。

4. 待检测样品基因变异可能会造成假阴性结果;待检测样品交叉污染、实验室环境污染以及试剂污染均会造成假阳性结果。

5. 不同批号的产品请勿混合使用,请在产品有效期内使用试剂盒,由于操作不当引起的误判,以及由此误判引发的其他事项,本公司概不负责。

6. 检测完毕后,根据相关规定正确处理废弃耗材以及扩增产物。