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FZ007BF2 单增李斯特氏菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48test

英文名称:PCR Detection Kit for Listeria monocytogenes (Fluorescent Probe Assays)

货 号 :FZ007BF2

规 格 :48测试/盒

用途:用于食品中单增李斯特氏菌的检测

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产品名称:单增李斯特氏菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
英文名称:PCR Detection Kit for Listeria monocytogenes (Fluorescent Probe Assays)

产品编号与包装规格:

产品编号产品类型包装规格
FZ007BF2PCR检测试剂盒48测试/盒

产品简介:本试剂盒适用于食品中单增李斯特氏菌的检测。

产品检验原理:基于 Real Time PCR 技术,利用针对于单增李斯特氏菌特异性基因的引物、荧光探针以及其他反应所需试剂,加入待检样品即可进行扩增反应。在发生扩增过程中,荧光探针与目的基因片段结合,可被 Taq 酶分解并产生荧光信号,此时荧光定量 PCR 仪可识别该荧光信号,同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线,进而判定单增李斯特氏菌是否检出。

产品组分:

单增李斯特氏菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)产品组成

灵敏度:最低检验限达到100 CFU/Test

所需其他材料和适用仪器荧光定量PCR仪(具有能够检测FAM标记的荧光通道)、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。

使用指南:

1. 样品前处理

1) 样品增菌液模板 DNA 的制备:
      a) 样品增菌:参照 GB 4789.30-2016《食品微生物学检验单增李斯特氏菌检验》,取样品 25 g(mL),加入到盛有 225 mL 李氏增菌肉汤(LB1)的无菌容器中均质,30±1℃培养 18-24 h;
      b) 吸增菌液1 mL到1.5 mL规格的无菌离心管中,6000 r/min 离心 5 min,弃上清,用 50 μL 无菌超纯水悬浮洗涤沉淀 1-2 次,6000 r/min 离心 5 min,完全去除上清;
      c) 加入 30 μL 裂解液,充分悬浮菌体,轻弹管壁消除气泡,99℃加热 10 min。
      d) 12000 r/min 离心 15 min,上清即为粗提的 DNA,可转移至 0.2 mL 无菌离心管中,在-20℃下可长期保存。

2) 可疑菌落模板 DNA 的制备:
      挑取可疑菌落,充分悬浮于预先加有 30 μL 裂解液的无菌离心管中,后按照上述步骤 c)、d)操作。

2. 加样、反应

1) 按照需求取 n 个 PCR 反应管(n=1 管阴性对照+待检测样品数+1 管阳性对照),从试剂盒中取出预混液,充分融化,涡旋后短暂离心,以上每管加入 20 μL 预混液,待用。

2) 向上述 n 个反应管中分别加入阴性对照、待测样品 DNA、阳性对照各 5 μL,盖紧管盖,短暂离心,立即进行 PCR 扩增反应。

3) PCR 反应体系为 25 μL,取 FAM 检测通道,在反应阶段 2 中 60℃时收集荧光信号,具体程序如下:

收集荧光信号

注:在反应阶段 2 中 60℃时收集荧光信号,对于多通道荧光 PCR 仪,取荧光素“FAM”为信号采集通道,淬灭基团选择“None”,染料校正选择“None”。

3. 结果

一般情况下,可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整,可根据所使用仪器的自身情况(如噪声等)以及选取的不同荧光通道进行调整。

1) 质量控制:
      阴性对照未出现明显的 S 型扩增曲线或Ct 值>35,阳性对照出现 S 型扩增曲线且其 Ct 值<30。若阴阳性对照不同时满足上述条件,则本次检测结果无效,应重新检测或与产品技术支持联系。

2) 结果判读:

单增李斯特氏菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)结果判读