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HKM017系列 T7 Endonuclease Ⅰ(T7核酸内切酶Ⅰ)

英文名称:T7 Endonuclease Ⅰ

货 号 :HKM017系列

规 格 :250U | 250U×5

用途:识别错配DNA,分解四方向交叉DNA或分支DNA等…

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产品名称:T7 Endonuclease Ⅰ
中文名称:T7 核酸内切酶Ⅰ

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HKM017系列T7 Endonuclease Ⅰ250U | 250U×5crispr基因编辑(T7 核酸内切酶Ⅰ)
HKM017-01AT7 Endonuclease Ⅰ250U540
HKM017-02AT7 核酸内切酶 Ⅰ250U×52398

产品描述:T7 Endonuclease Ⅰ 识别并切割不完全配对DNA、十字型号结构DNA、Holliday 结构 或 交叉DNA、异源双链DNA 或者以更慢的速度切割含切刻的 双链D'NA。该酶切割错配碱基 5’端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。

产品用途:
      1) 基因突变和SNP的检测,可应用于TALEN、CRISPR/Cas9 基因编辑形成的突变体检测;
      2) 识别错配DNA,分解四方向交叉DNA或分支DNA;
      3) 检测或切割异源二聚体DNA和切割DNA;
      4) 随机切割线性DNA进行shot-gun 克隆。

应用实例:图例) T7E1法检测突变体
      泳道1:野生型条带700bp;
      泳道2:突变型条带700bp;
      泳道3:野生型条带与突变型条带退火,产生T7EI 切割条带300bp+400bp。

 T7E1法检测突变体

注意事项:T7核酸内切酶Ⅰ是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的DNA底物。切割特定底物时,必须控制酶量和反应时间。反应温度超过42°C时,会增加非特异性核酸酶活性。避免反应温度超过55C,会导致酶活性降低。

保存温度:-20℃保存。

T7 Endonuclease Ⅰ 产品包装(A包装):

产品组成体积
T7 Endonuclease Ⅰ(10U/μl)25 μl
10×T7 Endonuclease Ⅰ Reaction Buffer1 mL
Control primer(10μM)20 μl
Control template C (30ng/μl)10 μl
Control template D (30ng/μl)10 μl

质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE 胶检测仅可见清晰单一的目的条带,纯度达90%,PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。

活性定义:1 单位指在50μl反应体系,37°C条件下,1小时将90%以上的 1μg 超螺旋十字型结构pUC(AT)转化成线性 DNA结构 所需的酶量。

操作步骤:

      1、分别以突变体DNA和野生型DNA为模板,PCR扩增含突变位点的片段,片段长度约500bp,突变位点避免位于片段中间,便于区分切割后条带;

      2、变性退火PCR产物

变性退火PCR产物

      3、酶切反应:上一步反应液中加入0.5ul T7EI 酶,37°C 保温15-30min,立即加入DNA loading buffer 终止反应,混匀后65°C保温 10 min,琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果。