产品名称:T7 Endonuclease Ⅰ
中文名称:T7 核酸内切酶Ⅰ
产品编号与包装规格:
编号 | 产品名称 (点击名称进入下单页面) | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
HKM017系列 | T7 Endonuclease Ⅰ | 250U | 250U×5 | crispr基因编辑(T7 核酸内切酶Ⅰ) | — |
HKM017-01A | T7 Endonuclease Ⅰ | 250U | 540 | |
HKM017-02A | T7 核酸内切酶 Ⅰ | 250U×5 | 2398 |
产品描述:T7 Endonuclease Ⅰ 识别并切割不完全配对DNA、十字型号结构DNA、Holliday 结构 或 交叉DNA、异源双链DNA 或者以更慢的速度切割含切刻的 双链D'NA。该酶切割错配碱基 5’端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。
产品用途:
1) 基因突变和SNP的检测,可应用于TALEN、CRISPR/Cas9 基因编辑形成的突变体检测;
2) 识别错配DNA,分解四方向交叉DNA或分支DNA;
3) 检测或切割异源二聚体DNA和切割DNA;
4) 随机切割线性DNA进行shot-gun 克隆。
应用实例:图例) T7E1法检测突变体
泳道1:野生型条带700bp;
泳道2:突变型条带700bp;
泳道3:野生型条带与突变型条带退火,产生T7EI 切割条带300bp+400bp。
注意事项:T7核酸内切酶Ⅰ是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的DNA底物。切割特定底物时,必须控制酶量和反应时间。反应温度超过42°C时,会增加非特异性核酸酶活性。避免反应温度超过55C,会导致酶活性降低。
保存温度:-20℃保存。
T7 Endonuclease Ⅰ 产品包装(A包装):
产品组成 | 体积 |
T7 Endonuclease Ⅰ(10U/μl) | 25 μl |
10×T7 Endonuclease Ⅰ Reaction Buffer | 1 mL |
Control primer(10μM) | 20 μl |
Control template C (30ng/μl) | 10 μl |
Control template D (30ng/μl) | 10 μl |
质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE 胶检测仅可见清晰单一的目的条带,纯度达90%,PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
活性定义:1 单位指在50μl反应体系,37°C条件下,1小时将90%以上的 1μg 超螺旋十字型结构pUC(AT)转化成线性 DNA结构 所需的酶量。
操作步骤:
1、分别以突变体DNA和野生型DNA为模板,PCR扩增含突变位点的片段,片段长度约500bp,突变位点避免位于片段中间,便于区分切割后条带;
2、变性退火PCR产物
3、酶切反应:上一步反应液中加入0.5ul T7EI 酶,37°C 保温15-30min,立即加入DNA loading buffer 终止反应,混匀后65°C保温 10 min,琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果。