English

手把手教你倒平板、划平板、涂布操作

发布时间:2023-01-11    浏览次数:357

一、无菌准备:

1、提前1个小时打开无菌室紫外灯消毒灭菌;
1、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒;
2、将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基等进行灭菌;
3、所有无菌操作都需在酒精灯旁操作。

二、培养基配置:

1、LB肉汤:肉汤粉330g、5g葡萄糖、1000mL蒸馏水;
2、营养琼脂培养基:琼脂培养基粉300g、5g葡萄糖、1000mL蒸馏水。

三、倒平板操作:

1、将灭菌过的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶,使瓶口迅速通过火焰;
2、用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖,轻轻摇匀。
3、等待平板冷却凝固(大约需5~10min) 后,将平板倒过来放置,使皿盖在下,皿底在上。

倒平板操作

四、平板划线操作:

1、将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红;
2、在火焰旁冷却接种环,并打开盛有菌液的试管的棉塞;
3、将试管口通过火焰;将已冷却的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液;将试管口通过火焰,并塞上棉塞;
4、左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖。注意不要划破培养基。
5、灼烧接种环,待其冷却后,从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作,在三区域内划线。注意不要将最后一区域的划线与第一区相连。

平板划线操作

6、将平板倒置,放入培养箱中培养。

五、稀释操作:

1、将分别盛有9mL水的6支试管灭菌,并按10~10的6次方(打不出六次方来)的顺序编号。
2、用移液管吸取1mL培养的菌液,注入10倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头,吹吸三次,使菌液与水充分混匀。

3、从10倍稀释的试管中吸取1mL稀释液,注入10²倍稀释的试管中,重复第2步的混匀操作。依次类推,直达完成最后一支试管的稀释。注:移液管需要经过灭菌。操作时,试管口和移液管应在离火焰的1~2cm处。

稀释操作

五、涂布平板操作:

1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中;
2、取少量菌液(不超过0.1mL),滴加到培养基表面;
3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却8~10s;
4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿,使涂布均匀。

涂布平板操作

注意事项:

1、将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时,要让多余的酒精在烧杯中滴尽,然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。
2、操作中一定要注意防火!不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中,以免引燃其中的酒精。