菌株如何规范保藏？瓷珠冻存法原理、步骤与注意事项

发布时间：2026-09-04 浏览次数：58 分享：

近年来，食品安全问题日益突出，细菌性食源性疾病会导致集体食物中毒事件。根据国家市场监督管理总局 2025年公布的抽检数据，微生物污染、超范围超限量使用食品添加剂和农兽药残留超标问题占不合格食品总数的 2/3 以上。

在微生物检测中，菌株对于病原微生物的鉴定和识别起着非常重要的指导作用，所以在食品微生物检测中，菌株的稳定和活力对于食品检测来说至关重要。

菌株保藏的目的是尽可能保持菌株原有性状和活力的稳定，使其不死亡、不变异、不被污染，以满足科研、实验或者生产等需要。为了防止菌株突变，保持纯种，最主要的保藏方法是提供干燥、低温、缺乏营养等条件。低温可以降低机体细胞的酶活性，降低菌种的新陈代谢;干燥与缺乏营养的环境使菌株处于最不活跃甚至是相对静止的状态;在保藏过程中使菌株不发生变异的同时保持活力。

保藏菌株的方法主要有斜面低温保藏法、液体石蜡覆盖保存法、甘油冻存法、载体保藏法(沙土保藏法、滤纸保藏法)、冷冻干燥保藏法和瓷珠冻存法等。

微生物是一类微观生物体，它们具有重要的生物功能和应用价值。然而，传统的保存方法如冷冻保存、干燥保存等存在一定的局限性，如保存时间短、容易导致细菌失活或突变等问题。为了解决这些问题，瓷珠冻存法应运而生。瓷珠就像微生物的「时间胶囊」，其表面特殊涂层通过物理吸附固定菌体细胞。当菌液与瓷珠混合时，细胞会紧紧贴附在瓷珠表面，快速脱水后形成保护膜。这种非化学性的结合方式，能保持菌株98%以上的存活率，且避免冷冻损伤或遗传突变。

瓷珠菌株冻存管

1、环凯瓷珠菌株冻存管三大优势：

便捷性：无无需复杂设备，常温下30秒完成菌株固定
稳定性：大部分保存的菌株在-80℃环境下可存活5年以上
兼容性：适配绝大多数细菌、酵母等微生物，尤其适合脆弱菌株

2、环凯瓷珠菌株冻存管的使用方法：

2.1，复苏

按照菌株供应商提供的使用说明进行复苏、复壮，培养后获得储备菌株。菌株复苏完成后，需要对菌株进行再次纯化以及鉴定，以保证菌株的单一性。

菌株冻存复苏的原则是慢冻快融，长时间的溶解会对冻存的菌株造成损伤，使菌种的复苏率下降。所以建议遵循菌株冻存复苏原则，保证所复苏菌株的复苏率。

2.2，挑取

从平板上刮取新鲜纯培养物(此时菌株处于生长的稳定期)于瓷珠菌株冻存管中，利用麦氏比浊管目测比浊，配成大约3~4麦氏比浊度的菌悬液。

被保存的菌株要是经过纯化后培养18~24h的新鲜菌株(一般细菌18-24h，酵母菌3天，形成子的微生物需要保存抱子，而放线菌和丝状真菌需培养7天后保存)，此时菌株活力强，冻存后易复苏。不宜使用老化或未经鉴定的菌株，老化菌株经过多次传代会发生变异或者活力下降，影响复苏率；未经鉴定的菌种则有可能混入杂菌，导致冻存的菌株非单一纯菌株。菌株的新鲜纯培养物需要达到一定的浓度，接种浓度过低会导致瓷珠上吸附的菌种量过少，降低复苏效果。

2.3，乳化

将瓷珠菌株冻存管拧紧，手动上下颠倒几次，使菌株达到乳化状态，不可以使用涡旋混匀器。手动上下颠倒，使菌悬液充分混匀乳化，使菌株充分、均匀的吸附到瓷珠上，使用涡旋混匀器反而会使菌株全部沉至管底，不利于菌悬液充分混匀，也不能均匀的吸附在瓷珠上。

瓷珠菌株冻存管详情图

2.4，吸取

使用一次性无菌吸管或无菌移液器将菌株冻存管内的液体全部吸取出来，此液体含有大量菌株，需要按照生物安全标准进行灭菌处理。

在复苏时的冻融过程中产生的冰晶会损伤菌株活性，所以当菌株冻存管中的菌种完全乳化并且均匀的吸附在多孔小瓷珠后,要将多余的菌株冻存液吸取出来。

2.5，冻存

将菌株置于冻存管中，拧紧冻存管，迅速将冻存管置于-20℃或-80℃的冰箱中。从目前的保存菌株的试验数据及实际保存效果来看，-20℃可保存1-5年，-80℃或液氨中可保存5~10年。

贮存在－80℃以下的低温中能减少菌株内冰晶的形成，大大降低冰晶对细菌的伤害，同时也可以为被冻存的菌株创造温度更低的环境，降低菌种的代谢，从而达到延长菌株保存时间的目的。

保存厌氧菌，应该提供厌氧环境，可以通过通入氮气来驱除保存菌株时所引入的氧气。菌株复苏时，也要创造厌氧环境。

2.6，再次取用

从冰箱中取出冻存管，迅速解冻，挑出瓷珠置于对应的液体培养基中培养或直接将瓷珠直接置于平板上划线培养。

环凯冻存管介绍：

货号	产品名称	规格	产品描述
DC01	液体菌株冻存管（不含磁珠，30%甘油）	1.5ml/支，50支/盒	30%甘油，适用普通细菌冻存
DC02	液体菌株冻存管（不含磁珠，40%甘油）	1.5ml/支，50支/盒	40%甘油，适用普通细菌冻存
DC03	半固体菌株保存管	1.5ml/支，50支/盒	半固体，适用普通细菌保存
DC04	脱脂奶菌株冻存管	1.5ml/支，50支/盒	10%脱脂奶，适用普通细菌冻存
DC05	瓷珠菌株冻存管	1.5ml/支，50支/盒	内含吸附瓷珠，适用大部分冻存
DC06	3%氯化钠液体菌株冻存管	1.5ml/支，50支/盒	3%氯化钠，适用弧菌保存
DC07	3%氯化钠半固体菌株冻存管	1.5ml/支，50支/盒	3%氯化钠半固体，适用弧菌保存
DC08	0.3ml PBS冻存管	0.3ml/支，50支/盒	0.3mlPBS，用于肛拭子的运输
DC09	液体菌株冻存管（含25%甘油的BHI肉汤）	1.5ml/支，50支/盒	25%甘油，适用普通细菌冻存
DC10	弯曲菌冻存管	1.5ml/支，50支/盒	弯曲菌特定保存液，适用于弯曲菌属细菌的冻存。

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