产品名称：克罗诺杆菌属核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
英文名称：PCR Detection Kit for Cronobacter spp. (Fluorescent Probe Assays)
产品编号与包装规格：
| 编号 | 规格 |
|---|---|
| FZ012BF2 | 48 测试/盒 |
产品简介：本试剂盒仅适用于食品中克罗诺杆菌属的定性检测,其他试验需另按照国标《GB 4789.40-2024 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌检验》开展。
检测原理：本产品基于Real Time PCR技术，参考SN/T5364.8-2021标准，利用针对于克罗诺杆菌属MMS基因的引物、荧光探针以及其他反应所需试剂，加入待检样品即可进行扩增反应。在发生扩增过程中，荧光探针与目的基因片段结合，可被Taq酶分解并产生荧光信号，此时荧光定量PCR仪可识别该荧光信号，同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线，进而判定克罗诺杆菌是否检出。
克罗诺杆菌属核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)产品组分：
储存条件与保质期：-20℃避光储存，有效期为12个月，避免反复冻融。
灵敏度：最低检验限达到10~100 CFU/Test。
所需其他材料和适用仪器：荧光定量PCR仪（具有能够检测FAM标记的荧光通道）、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。
克罗诺杆菌属核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)使用指南：
1，样品前处理
A：样品增菌液模板DNA的制备
a)根据国标方法将样品置于增菌培养基培养，36 ℃±1 ℃增菌18~20 h；
b)取以上增菌液1 mL到1.5 mL规格的无菌离心管中，6000 r/min离心5 min，完全去除上清；
c)加入30 μL裂解液充分悬浮管底沉淀，轻弹管壁消除气泡，99℃加热10 min；
d)12000 r/min离心15 min，上清即为待测样品DNA，静置冰上，长时间不用应再次离心。-20℃保存。
B：可疑菌落模板DNA的制备：
a)挑取可疑菌落，充分悬浮于预先加有30μL裂解液的无菌离心管中，充分悬浮管底沉淀，轻弹管壁消除气泡，99℃加热10 min。
b)12000 r/min离心15 min，上清即为待测样品DNA，静置冰上，长时间不用应再次离心。-20℃保存。
2，加样、反应
1)按照需求取n个PCR反应管（n=1管阴性对照+待检测样品数+1管阳性对照），从试剂盒中取出预混液，充分融化，涡旋后短暂离心，以上每管加入20 μL预混液，待用。
2)向上述n个反应管中分别加入阴性对照、待测样品DNA、阳性对照各5 μL，总反应体积为25 μL。盖紧管盖，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。
3)PCR反应体系为25 μL，取FAM检测通道，在反应阶段2中60℃时收集荧光信号，具体程序如下：
注：在反应阶段2中60℃时收集荧光信号，对于多通道荧光PCR仪，取 “FAM”为信号采集通道，淬灭基团选择“None”，染料校正选择“None”。
3，结果
一般情况下，可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整，可根据所使用仪器的自身情况（如噪声等）以及选取的不同荧光通道进行调整。
1)质量控制：阴性对照未出现明显的S型扩增曲线或Ct值＞40，阳性对照出现S型扩增曲线且其Ct值＜30。若阴阳性对照不同时满足上述条件，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
2)结果判读：根据反应所得Ct值判读，具体见下表：
更多实时荧光PCR检测试剂盒(食源性致病菌检测系列) 产品列表：
| 货号 | 产品名称 | 用途 |
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