我国首个片球菌属检验国家标准发布：检测方法详解与环凯产品解决方案

发布时间：2026-06-10 浏览次数：30 分享：

片球菌属（Pediococcus）是食品工业中常用的益生菌菌种，广泛应用于发酵食品、菌种制剂等领域。然而，长期以来，我国尚无专门针对片球菌属的国家标准和行业标准。这项标准的出台将填补国内空白，为片球菌属的质量控制和市场监管提供权威技术依据。

本标准基于欧洲标准 EN 15786:2021 培养基体系进行优化，首次将传统培养、生化鉴定、实时荧光PCR、MALDI-TOF质谱四种方法整合为统一标准，实现从"计数"到"鉴定"的全链条覆盖。

食品用菌种检验片球菌属检验（征求意见稿）

一、计数方法：选择性培养基的"双轨制"设计

为了应对不同基质的样品，标准引入了“双轨制”的培养基选择策略，兼顾了纯菌种制剂和复杂食品基质的需求。

场景	培养基	关键添加剂
纯片球菌或绝对优势菌	MRS琼脂培养基	无（基础培养）
含其他杂菌的混合样品	改良MRS琼脂培养基	半胱氨酸盐酸盐（还原剂，助生长）万古霉素（抑制G⁺菌）新生霉素（抑制G^-菌）

1）纯菌种或优势菌群：对于纯片球菌或其含量远高于其他微生物的样品，标准推荐使用MRS琼脂培养基，操作简便。

2）复杂混合样品：针对含有其他杂菌的混合样品，标准引入了改良MRS琼脂培养基。该培养基通过添加半胱氨酸盐酸盐、万古霉素和新生霉素，实现了“抑杂菌、促生长”的效果：

半胱氨酸盐酸盐作为还原剂，可降低培养基氧化还原电位，促进片球菌等兼性厌氧菌的生长，同时抑制需氧菌生长。
新生霉素可抑制肠杆菌、变形杆菌等革兰氏阴性菌。
万古霉素可抑制革兰氏阳性菌。

3）培养条件：36℃±1℃，有氧，48h~72h

4）典型菌落特征：灰白色，直径1.0mm~3.0mm

5）样品制备：特别注意，食品用菌种/菌种制剂通常采用1:100稀释（防止计数过载），而普通食品采用1:10稀释。

乳酸片球菌CICC20719接种于MRS琼脂培养基菌落特征与戊糖片球菌FSCC196002接种于改良MRS琼脂培养基菌落特征

二、鉴定方法：经典与前沿的“三驾马车”

标准不仅解决了“有多少”的计数问题，更提供了“是什么”的鉴定方案，构建了从经典到前沿的三级鉴定体系。

1、鉴定第一法：生化鉴定——经典方法的系统化升级

1）标准流程：

片球菌属检验标准流程

★ 作为鉴定的基础，本标准对传统的生理生化试验进行了系统化升级。标准明确了片球菌属的镜检特征（革兰氏阳性球菌，成对或四联排列），并优化了生化鉴定表。

2）五种常见片球菌的关键生化鉴别点：

五种常见片球菌的关键生化鉴别点

3）技术意义：生化法是鉴定基础，但标准明确"可使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统"，为实验室自动化升级留出空间。通过检测菌株对特定糖类（如L-阿拉伯糖、D-核糖）的代谢能力，可以有效区分乳酸片球菌、戊糖片球菌等常见种。

2、鉴定第二法：实时荧光PCR法——分子确证的"双靶标"策略

为了实现快速、精准的种水平鉴定，标准建立了实时荧光PCR法，采用创新的“双靶标”策略。

常见片球菌属实时荧光PCR检测引物和探针序列

属水平监测：以16S rRNA基因为片球菌属通用标记，确保属水平不漏检。
种水平区分：以ldhD基因为靶标，特异性识别乳酸片球菌，实现种水平精准区分。如果样品16s rRNA阳性而ldhD阴性，则判定为戊糖片球菌。

这种设计兼顾了检测的广谱性和特异性，大大提升了鉴定效率。

3、第三法：MALDI-TOF质谱法——快速鉴定的前沿选择

1）方法定位：可选做方法，按仪器使用说明操作及判定

2）技术优势：

检测速度快（数分钟获得结果）
高通量能力（一次可检测多个样品）

3）实施要点：

需使用经确认的片球菌属参考谱图数据库
建议结合16S rRNA测序进行数据库校准
对新型或罕见片球菌种可能存在鉴定盲区

4）方法定位：质谱法作为"可选做"而非强制方法，体现了标准的务实性——既鼓励先进技术应用，又充分考虑基层实验室设备配置差异。但实验室需自建或验证片球菌属质谱数据库，这是方法可靠性的关键。

总结：

《食品安全国家标准食品用菌种检验片球菌属检验》的制定具有里程碑式的意义：

监管层面：填补标准空白，为食品用菌种的安全监管提供了法律和技术支撑。
产业层面：规范片球菌产品质量评价体系，有助于引导行业健康有序发展。
技术层面：整合了经典培养、分子生物学和质谱技术，方法先进、可靠、可操作性强。
国际层面：该标准在计数方法上对标欧洲标准（EN 15786:2021），有助于提升我国标准国际互认度。

标准的即将实施，为我国片球菌属检验搭建了完整的技术框架，质量控制自此有章可循。

”食品安全国家标准食品用菌种检验片球菌属菌属检验（征求意见稿）“ 环凯产品解决方案

用途	产品类型	货号	名称	规格
稀释	即用型	CP0310A	生理盐水	225mL×6瓶/盒
	即用型	CP0630A	生理盐水	225mL×10袋/盒（带滤网）
	即用型	CP0630	生理盐水	225mL×10袋/盒
分离纯化	干粉	027319	MRS琼脂培养基(莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS琼脂培养基基础)	250g/瓶
分离纯化	配套试剂	SR1100	改良MRS配套试剂（含新生霉素、万古霉素、半胱氨酸盐酸盐）	10支/盒
生化鉴定	即用型	029010	革兰氏染色液	10mL×4瓶
	即用型	029161	3%过氧化氢溶液	2mL×10支/盒
	即用型	075680	6.5%高盐肉汤	20支/盒
	即用型	075060	阿拉伯糖	20支/盒
	即用型	075400	D-核糖	20支/盒
	即用型	075070	D-木糖	20支/盒
	即用型	075080	D-半乳糖	20支/盒
	即用型	075010	D-葡萄糖	20支/盒
	即用型	075550	D-果糖	20支/盒
	即用型	075110	鼠李糖	20支/盒
	即用型	075040	甘露醇	20支/盒
	即用型	075570	D-纤维二塘	20支/盒
	即用型	075030	D-麦芽糖	20支/盒
	即用型	075020	D-乳糖	20支/盒
	即用型	075050	D-蔗糖	20支/盒
	即用型	075530	D-海藻糖（覃糖）	20支/盒

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